EJEMPLO DE TERAPIA CELULAR EN PARKINSON

Imagen obtenida de: http://www.fundacionmencia.org/wp-content/uploads/2015/11/terapia-celular-solucion-enfermedades-raras-fundacion-mencia-esp.jpg

Tipo de Stem Cell	Células de origen fetal, células cromafines de la médula suprarrenal, células troncales neuronales del cerebro adulto.
Método de Obtención	-El tejido fetal se obtuvo de abortos electivos y posteriormente se cultivaron. -El tejido suprarrenal se obtuvo de un donador cadavérico de 14 años, las células cromafines se cultivaron y estimularon con CM-EBF. -Las células troncales se cultivaron en el laboratorio por largos periodos y luego se diferencian en neuronas o glía cuando se requiera.
Vía de Administración	Se lo realizó mediante microcirugía abierta y cirugía estereotáxica en la cabeza del núcleo caudado de la paciente.
Resultados	Corto Plazo	Los primeros pacientes parkinsonianos que recibieron trasplante autólogo de médula suprarrenal tuvieron una respuesta muy pobre.
	Mediano Plazo	El trasplante se puso en contacto con el líquido cerebroespinal, lo que incrementó probablemente la sobrevida del implante e indujo una mejoría significativa de la rigidez y la acinesia.
	Largo Plazo	Se estima que en un futuro se podrá tratar de mejor forma estas enfermedades, sin embargo, aún se debe estudiar y comprender de forma integral la terapia celular porque aún existen resultados que no arrojan buenos resultados.

Bibliografía:
1. Arias O. Terapia Celular en la Enfermedad de Parkinson [Internet]. Revecuatneurol.com. 2015 [cited 27 December 2019]. Available from: http://revecuatneurol.com/wp-content/uploads/2015/06/Terapia.pdf

De Apoyo:
2. Prósper F. Trasplante celular y terapia regenerativa con células madre [Internet]. Scielo. 2016 [cited 27 December 2019]. Available from: http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1137-66272006000400018

Ejemplo de transgénico animal en la EP

El modelo más empleado hasta el día de hoy para transgénesis en la EP sigue siendo el ratón, por ser un homologo humano en un 99% del genoma. Las modificaciones que más comúnmente se realizan en el modelo murino están enfocadas en los genes LRRK2, PARK7, PARK2, PINK1.  Se ha realizado la sobreexpresión de mutaciones del gen de SNCA (A30P y A53T) en ratones y ratas, observándose defectos en la transmisión de dopamina y la presencia de depósitos de α-sinucleína alrededor del cerebro.(1)

Imagen tomada de: http://epmundo.com/2018/asi-son-los-avances-de-la-cura-del-mal-de-parkinson/

Tema	Modelo transgénico de la enfermedad de Parkinson en estudios preclínicos.
Tipo de Animal Transgénico	Ratón transgénico KO (Knock-out)
Método de Obtención	Inyección unilateral del virus en el estriado, causando la pérdida de neuronas dopaminérgicas y la presencia posterior de inclusiones de α-sinucleína
Usos	-Similar la enfermedad de Parkinson para su posterior estudio y tratamiento. -Desarrollo de fármacos que permitan el tratamiento efectivo de la EP.

Ventajas:

• ·         Búsqueda de mejores tratamientos, terapias y procedimientos diagnósticos para las enfermedades (EP).
• ·         Estudio de las resistencias que genere el animal frente a la enfermedad inoculada.
• ·         Analizar el comportamiento que muestra el animal frente a la enfermedad inoculada.
• ·         Facilitan un mayor entendimiento de los mecanismos de funcionamiento y control de los genes.
• ·         Determinar las diversas susceptibilidades que presenta el animal en cada etapa de la enfermedad.

Desventajas:

• ·         Esta práctica presenta costos muy elevados.
• ·         Al utilizar nuevas técnicas, puede poner en peligro al medio natural y ocasionar plagas.
• ·         Pocos modelos transgénicos sobreviven a los distintos procesos.
• ·         Puede existir expresión variable dentro de las distintas líneas germinales.
• ·         Resultados pueden ser erróneos y poco reales frente a las enfermedades que se busca tratar.

Bibliografía:

1. Cota A. Modelo transgénico de la enfermedad de Parkinson en estudios preclínicos. [Internet]. Ciatej. 2016 [cited 18 December 2019]. Available from: https://ciatej.mx/files/divulgacion/divulgacion_5cd0aa9319d46.pdf#page=84

De Apoyo:
2. López J. ¿Que nos enseñan los modelos animales y celulares sobre la enfermedad de Parkinson? [Internet]. Idus.us.es. 2015 [cited 18 December 2019]. Available from: https://idus.us.es/xmlui/bitstream/handle/11441/17790/%BFQue%20nos%20ense%F1an%20los%20modelos%20animales%20y%20celulares%20sobre%20la%20enfermedad%20de%20Parkinson.pdf?sequence=1

Ejemplo de ADN recombinante en Parkinson

ADN recombinante artificial en la Enfermedad de Parkinson

Imagen obtenida de: https://elmedicointeractivo.com/wp-content/uploads/2019/11/parkinson.jpg

T	LRRK2 regula la actividad autofágica y se localiza en microdominios de membrana específicos en un nuevo modelo celular de indicador genómico humano
O	Identificar las funciones que cumple la LRRK2 en la vía endosómica-autofágica para observar su incidencia en el aparecimiento de la enfermedad de Parkinson y con ello crear un tratamiento apropiado para los pacientes.
G	LRRK2
ER	Eco RI / Xho I
EL	pBlueSKM (Invitrogen); ADN ligasa T4
V	BAC-YPet- LRRK2 -WT; pH-FRT-Hy
CR	Células HEK293
MTG	Transfección
MIC	Cultivo, inmunotransferencia, inmunoprecipitación, inmunofluorescencia indirecta.

Conclusión: La investigación indica que la LRRK2 si tiene un papel clave en la incidencia de la enfermedad de Parkinson, sin embargo se necesitan aún más estudios para determinar el grado con el cual se manifiesta y posibles terapias que reduzcan su impacto(1).

Bibliografía:

1. Alegre J. LRRK2 regula la actividad autofágica y se localiza en microdominios de membrana específicos en un nuevo modelo celular de indicador genómico humano [Internet]. Academic. 2011 [cited 14 December 2019]. Available from: https://academic.oup.com/hmg/article/18/21/4022/2527063#85571625

Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos que suceden en la naturaleza

RECOMBINACIÓN DE ADN EN LA NATURALEZA

La recombinación genética es un proceso que lleva a la obtención de un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA de dos orígenes diferentes. Como ejemplo, en la naturaleza se observa recombinación genética en bacterias, las cuales presentan 3 procesos: en la transformación, la bacteria acepta y recombina su genoma con ADN libre en el medio, en la transducción el ADN donador procede de un virus o en la conjugación, en este caso el ADN donador lo aporta un plásmido¹.


Bibliografía:
1. Mateos P. RECOMBINACIÓN GENÉTICA [Internet]. ResearchGate. 2010 [cited 5 December 2019]. Available from: https://www.researchgate.net/publication/261983351_RECOMBINACION_GENETICA

De apoyo:
2. Betancor L. Genetic [Internet]. Genética Bacteriana. 2016 [cited 5 December 2019]. Available from: http://130.206.160.21/rid=1NQMWD86S-1N93KN5-R6/GeneticaBacteriana.pdf

Un metaanálisis de datos públicos de microarrays identifica redes reguladoras biológicas en la enfermedad de Parkinson

De acuerdo a un estudio realizado se examinaron genes comunes expresados ​​diferencialmente (DEG) de varios conjuntos de datos de microarrays de sangre de pacientes con enfermedad de Parkinson (PD) y sustancia negra (SN) mediante un metaanálisis. Se seleccionaron los genes específicos de PD de DEG comunes usando GCBI. A continuación, utilizamos una serie de software de bioinformática para analizar los miRNA, lncRNA y SNP asociados con los genes comunes específicos de PD, y luego se identific{o la red mTF-miRNA-gene-gTF.(1)

Bibliografía:

1. Zhen C. Un metaanálisis de datos públicos de microarrays identifica redes reguladoras biológicas en la enfermedad de Parkinson. [Internet]. PubMed. 2019 [cited 30 November 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29653596

Estudio de Enfermedad de Parkinson con Southern Blot

Estudio de Enfermedad de Parkinson con Southern Blot

Southern blot es una técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de ADN en una muestra de sangre o tejido. Las muestras de necropsias de cerebro, córtex frontal e hipocampo en pacientes con EP se analizaron mediante Southern blot, hibridando con una sonda mitocondrial. También se analizaron las mutaciones puntuales G3196A, A3397G, A4336G y G5460A/T.¹

BIbliografía:

1. S.L.U. 2. Enfermedad de Parkinson y su relación con defectos mitocondriales [Internet]. Neurologia.com. 2019 [cited 23 November 2019]. Available from: https://www.neurologia.com/articulo/2001060

Análisis de mutaciones en los genes PINK1 Y PARKIN en pacientes colombianos con enfermedad de Parkinson

Análisis de mutaciones en los genes PINK1 Y PARKIN en pacientes colombianos con enfermedad de Parkinson 

Criterios a Evaluar	Características
Tema	Análisis de mutaciones en los genes PINK1 Y PARKIN en pacientes colombianos con enfermedad de Parkinson
Objetivo	Determinar el grado de mutación que presentan los genes a estudiar para realizar un diagnóstico de cada paciente y con ello administrar fármacos de acuerdo a cada alteración que se obtenga.
Tipo de Muestra	Muestra de sangre periférica por venopunción, con firma previa del consentimiento informado.
Genes a Amplificar	Gen PINK1 (135pb) Gen PARKIN (204pb)
Tipo de Ácido Nucleico	ADN Genómico
Extracción del ADN	Se utilizó el kit comercial, Quick-gDNA TM MiniPrep (ZYMO Research Corp, Irvine, Estados Unidos), siguiendo el protocolo establecido.
Tipo de PCR	PCR múltiplex Este proceso ocurrió en 30 ciclos. ·  Desnaturalización Inicial: 95°C por 3 minutos ·  Desnaturalización: 95°C por 30 segundos ·  Elongación: 63°C por 30 segundos ·  Terminación: 72°C por 5 minutos
Purificación	Se utilizó el método de etanol-acetato de amonio
Visualización	Se visualizó en gel de agarosa
Sensibilidad y Especificidad	En el artículo no se especifica este apartado

Conclusión

Este estudio demostró que sí existe la presencia de una mutación en el exón 2 del gen PARKIN, lo cual resulta de gran importancia para poder prevenir y diagnosticar al resto de la población colombiana¹. 

Bibliografía:

1. Infante C. Análisis de mutaciones en los genes PINK1 Y PARKIN [Internet]. Scielo. 2014 [cited 16 November 2019]. Available from: http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v12n21/v12n21a01.pdf

Prueba Confirmatoria

Prueba aguda de levodopa

La prueba o reto de levodopa se utiliza principalmente para evaluar y predecir la respuesta a levodopa; sin embargo, una prueba positiva apoya el diagnóstico de EP mientras que una prueba negativa obliga a considerar otros síndromes parkinsónicos. La sensibilidad, especificidad y valor predictivo positivo global de la prueba aguda de levodopa para predecir el diagnóstico de EP es de 70.9, 81.4 y 88.6%, respectivamente^{1 2}.

    Bibliografía:

1. Briceño H. Diagnóstico premotor de la enfermedad de Parkinson [Internet]. Medigraphic.com. 2012 [cited 9 November 2019]. Available from: https://www.medigraphic.com/pdfs/gaceta/gm-2011/gm111d.pdf

2. Milán S. Prevalencia de trastornos neuropsiquiátricos en pacientes con enfermedad de Parkinson (EP) no tratados [Internet]. Medigraphic.com. 2016 [cited 9 November 2019]. Available from: https://www.medigraphic.com/pdfs/gaceta/gm-2016/gm163l.pdf

Prueba de Tamizaje para el Parkinson

Pruebas de detección de deterioro cognitivo

MMSE

La Mini prueba del estado mental, es un método muy utilizado para detectar el deterioro cognitivo y vigilar su evolución en pacientes con alteraciones neurológicas, especialmente en ancianos. Su práctica toma únicamente entre 5 y 10 minutos, por lo que es ideal para aplicarse en forma repetida y rutinaria. Es una herramienta de tamizaje, permite sospechar déficit cognitivo pero que, sin embargo, no permite detallar el dominio alterado ni conocer la causa del padecimiento, por lo que nunca debe utilizarse para reemplazar a una evaluación clínica completa del estado mental¹.

Bibliografía:

1. Alegría J. Utilidad de la evaluación cognitiva de Montreal en relación al minimental test para determinar deterioro cognitivo en pacientes con enfermedad de Parkinson [Internet]. Repositorio.unan.edu.ni. 2016 [cited 9 November 2019]. Available from: http://repositorio.unan.edu.ni/2914/1/12259.pdf

Alteraciones en la Epigenómica del Parkinson

ALTERACIONES EN LA EPIGENÓMICA DEL PARKINSON

Remodelación de la cromatina en Enfermedad de Parkinson (EP)

Hay un desequilibrio patológico en la EP entre acetilación y desacetilación de las histonas, observando que la acetilación de histonas debilita la unión de estas al ADN, facilitando la accesibilidad de factores de transcripción y formación de complejos con la RNA polimerasa II; la desacetilación produce la compactación de la cromatina aumentando el silenciamiento génico. Se ha identificado una correlación negativa entre la metilación del intrón 1 de SNCA y la expresión de SNCA, y esta metilación disminuye en el putamen y corteza de pacientes con EP¹.

Bibliografía:
1. Rojo P. 2015 [Internet]. Riull.ull.es. 2019 [cited 2 November 2019]. Available from: https://riull.ull.es/xmlui/bitstream/handle/915/3706/Estudio%20epigenetico%20del%20transportador%20de%20dopamina%20y%20su%20relacion%20con%20la%20enfermedad%20de%20Parkinson.pdf?sequence=1

Alteraciones de la Traducción en el Parkinson

Alteraciones de la Traducción en el Parkinson

La evidencia acumulada indica un papel importante para la traducción de ARNm en la patogénesis de la enfermedad de Parkinson resultante de mutaciones ligadas a la enfermedad en genes que incluyen LRRK2, pink1, parkin y DJ-1. LRRK2 (quinasa repetida rica en leucina2) es una proteína multidominio grande con dominios enzimáticos de GTPasa y quinasa similares a RAS en los que se agrupan numerosas mutaciones ligadas a la enfermedad del Parkinson¹.

Bibliografía:
1. Ibson M. Decoding Parkinson's Disease Pathogenesis: The Role of Deregulated mRNA Translation. [Internet]. PubMed. 2019 [cited 25 October 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26889638

Alteraciones de la Transcripción en el Parkinson

Alteraciones de la Transcripción en el Parkinson

Basado en un estudio en pacientes que padecen de la enfermedad de Parkinson, científicos han señalado que alteraciones en el gen PITX3 están altamente vinculados con esta enfermedad. Estas alteraciones se conocen como SNP (single nucleotide polymorphism) y se ven asociadas en este caso con el SNP rs2281983, el cual puede estar involucrado en la regulación de la expresión génica o el cambio de conformación al afectar la unión del factor de transcripción y el empalme nativo¹.

Imagen tomada de : https://cdn.kastatic.org/ka-perseus-images/0f84f6d4797b9d72eea89d4d9c4b097694a78a5c.png

Bibliografía:

1. Nguyen D. ClinicalKey [Internet]. Transcription factor PITX3 gene in Parkinson's disease. 2019 [cited 19 October 2019]. Available from: https://www.clinicalkey.es/#!/content/playContent/1-s2.0-S0197458009001122?returnurl=https:%2F%2Flinkinghub.elsevier.com%2Fretrieve%2Fpii%2FS0197458009001122%3Fshowall%3Dtrue&referrer=http:%2F%2Fmeygan-cordova.blogspot.com%2F2014%2F11%2Falteraciones-en-la-transcripcion-en-la.html

Alteraciones de la Genómica en el Parkinson

Alteraciones de la Genómica en el Parkinson

Se trata de una enfermedad multifactorial causada por la interacción de factores genéticos. Se han identificado hasta 11 genes responsables de formas monogénicas de la enfermedad, tanto dominantes (SNCA, LRRK2 y VPS35) como recesivos (PARK2, PINK1, DJ-1, ATP13A2, PLA2G6, FBXO7 y DNAJC6). La deficiencia de HPRT provoca una regulación anormal de muchas funciones celulares que controlan importantes mecanismos de funcionamiento y reproducción, replicación y reparación del ADN ocasionando las alteraciones neurológicas en la enfermedad de Parkinson¹.

Imagen tomada de: https://www.tucanaldesalud.es/es/canalciencia/articulos/novedades-tratamientos-parkinson.ficheros/352746-novedades-parkinson.jpg?width=550&height=481&aspectRatio=true

Bibliografía:

1. Parrado C. Estudio de las bases genéticas implicadas en la enfermedad de Parkinson [Internet]. Dialnet. 2019 [cited 8 October 2019]. Available from: https://dialnet.unirioja.es/servlet/dctes?codigo=233432

Enfermedad de Parkinson

Enfermedad de Parkinson

La enfermedad de Parkinson consiste en un desorden crónico y degenerativo de una de las partes del cerebro que controla el sistema motor y se manifiesta con una pérdida progresiva de la capacidad de coordinar los movimientos. Presenta varias características particulares: temblor de reposo, lentitud en la iniciación de movimientos y rigidez muscular¹.

Imagen tomada de: https://www.google.com/url?sa=i&source=images&cd=&ved=2ahUKEwjolr69qvzkAhUKUK0KHdS6BVIQjRx6BAgBEAQ&url=https%3A%2F%2Fibecbarcelona.org%2Fes%2Fportfolio-items%2Fa-por-el-parkinson%2F&psig=AOvVaw1SEVsgGeDD0Uhrv1LQYsoU&ust=1570062927840541

Bibliografía:

1. Enfermedad de Parkinson - Síntomas y causas [Internet]. Mayoclinic.org. 2019 [cited 1 October 2019]. Available from: https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/parkinsons-disease/symptoms-causes/syc-20376055